La proteína fluorescente verde (gfp) es un tipo de proteína bioluminiscente que se encuentra en los coelenterados. gfp es fácil de detectar, alta sensibilidad, propiedades estables de fluorescencia, fuerte tolerancia, fácil de expresar, sin citotoxicidad, utilizado para la detección de células vivas. por lo tanto, la gfp puede usarse como un gen informador para detectar la expresión o regulación génica, o como una etiqueta de fusión para detectar la localización, migración, cambio de conformación e interacción intermolecular de la molécula de proteína, o marcador dirigido de algunos orgánulos. el pico máximo del espectro de absorción de gfp es 395 nm (uv) y con un pico de absorción adjunto de 470 nm (rayo azul). el pico máximo del espectro de emisión es 509nm (rayo verde) y con un pico lateral de 540nm (shouder). 450nm-490nm solo es el pico de absorción del diputado de gfp, pero debido a que la luz de excitación hace menos daño a las células, la banda generalmente se usa con más frecuencia (principalmente 488nm). Además, las propiedades del espectro de gfp son similares a isotiocianato de fluoresceína (fitc), los dos generalmente tienen un conjunto de filtros. la fluorescencia de gfp es extremadamente estable. bajo la luz de excitación, la capacidad de foto-blanqueamiento gfp es más fuerte que la fluoresceína. en particular, es más estable en la onda del rayo azul de 450 nm a 490 nm. de manera similar, la sensibilidad de la fluorescencia de la proteína de fusión gfp es más alta que el anticuerpo fluorescente del marcado con fluorocromos, es una fuerte capacidad de blanqueo anti-luz, que es más adecuada para la determinación cuantitativa y el análisis. la generación de fluorescencia gfp no necesita ningún sustrato de reacción exógeno. por lo tanto, gfp como una proteína reportera viviente ampliamente aplicada, su efecto no tiene comparación con ninguna otra proteína indicadora de enzima. sin embargo, gfp no es enzima. la señal de fluorescencia no tiene efecto de amplificación enzimática. por lo tanto, la sensibilidad de la gfp es menor que la de otras proteínas indicadoras de enzimas, como la luciferasa de luciérnaga.

las formas de observar gfp:

Fuente de luz de excitación gfp 1.portable

El uso de la fuente de luz de excitación portátil gfp es el método de observación más conveniente y rápido (llamado espejo de observación de proteína fluorescente). debido a que gfp tiene un pico de absorción más alto en 470nm, el uso de una fuente de luz de excitación de 470nm puede estimular que la gfp emita una fluorescencia verde brillante. debemos usar vidrio de observación profesional para observar la señal de fluorescencia clara cuando observamos fluorescencia gfp . la razón es la luz de excitación es luz azul intensa.

Fuente de luz 2.uv

usando una fuente de luz ultravioleta (llamada lámpara de luz ultravioleta , la lámpara de luz negra) la observación también es muy conveniente. pero si observas la planta, el verde frondoso del follaje de las plantas también es fluorescente bajo la luz ultravioleta. va a interferir para fluorescencia gfp . además, las muestras también pueden causar daños a las muestras de gfp bajo luz ultravioleta.

3. microscopio de fluorescencia

El microscopio de fluorescencia se basa en la luz ultravioleta como fuente de luz, se usa para irradiar el objeto detectado, lo hace fluorescente y luego observa la forma y la ubicación del objeto bajo un microscopio. El microscopio de fluorescencia se utiliza para investigar la absorción de sustancias intracelulares, el transporte, la distribución y la ubicación de sustancias químicas. algunas sustancias en la célula, como el verde de hojas, pueden emitir fluorescencia después de la irradiación de la luz ultravioleta. otras sustancias, no fluorescen en sí mismas, pero si lo tiñe con un tinte fluorescente o un anticuerpo fluorescente, también puede producir fluorescencia con luz ultravioleta. el microscopio de fluorescencia es una de las herramientas para la investigación cualitativa y cuantitativa de tales sustancias. en la actualidad, el método popular es el uso de la observación con microscopio de fluorescencia. el microscopio de fluorescencia es muy popular en el laboratorio. pero la única deficiencia es que las rebanadas de hojas o animales deben ser recolectadas para su observación, lo que destruirá los especímenes cultivados y no podrá observar la vivipercepción.

análisis integral, es el método más rápido y conveniente para observar gfp mediante la adopción de una fuente de luz de excitación portátil gfp (llamada BIOS-Cope transgénica).